由于精神分裂症的临床症状的多样性,故有假说认为该病在病因上是异质性的[1]"虽然精神分裂症的遗传模式尚不清楚,但是遗传因素在其发病机制中起了重要作用[2]"目前,该病被认为是遗传模式复杂的多因素疾病[3],同时,临床症状的多样性可能与不同的基因所起的作用有关"多巴胺(DA)功能增高一直被认为是精神分裂症的生化基础,但目前对编码DA受体和DA代谢酶的基因研究都未能得出明确结论"研究发现神经肽,如胆囊收缩素(CCK)与DA位于同一神经元上,且具有调节DA能功能的作用[4,5]"一些研究提示CCK可能在精神分裂症的发病机制中起到重要作用[6,7]"本研究旨在探讨CCK受体基因是否与精神分裂症的精神症状之间存在一定的关系"

资料和方法

一!研究对象

11患者组:为北京回龙观医院住院治疗的慢性精神分裂症患者,符合国际疾病分类第10版的精神分裂症诊断标准,共84例,年龄30~67岁,平均(44?9)岁;均为男性中国汉族人,无血缘关系"

21对照组:为70名男性健康献血员"

二!研究方法

11DNA提取:每例受试者取静脉血4ml,采用乙二胺四乙酸抗凝,按常规提取DNA"

21CCK2A受体基因型检测:利用国际互联网从人类基因库中查到CCK2A基因序列(GenBank编号U23427)及其引物序列"在CCK2A基因第1270位置上存在能被PstI酶切割的多态性"根据引物设计原则,我们设计的一对引物序列如下:上游引物5c2CTGTTCACTTGAGGAGCTTTG23c(1007~1027),下游引物5c2TTAG

CTGACCTCCAACATGG23c(1728~1750)"这样包含多态性位点的聚合酶链反应(PCR)产物长度为744bp,可被PstI切割为264bp和480bp两个片段,其中未能被切开的记作A1,被酶切开的记作A2"PCR体系为25Ll,内含200ng基因组DNA!215mmol/LdNTP!10pmol/L引物!1@buffer缓冲液及012UTaq酶,反应在PE2400型扩增仪上进行,程序为94e10min,38个循环周期(94e30s,58e30s,67e45s),72e10min"取PCR产物,加1UPstI内切酶,于37e酶切4h"2%琼脂糖电泳分离酶切产物,EB染色,应用数码照相机在紫外线灯下照相,并存入计算机;打印出结果后,根据电泳带型确定CCK2A基因型"

31临床资料评定:用自我编制的量表,根据患者的病史资料,由主管医师记录患者的一般情况!首次发作时的详细症状和诊断!目前诊断!家族史等30余项条目"临床症状采用有或无的方式评定"排除资料不全或难以判断的病例"

41数据处理:应用优化拟合V2检验计算基因型分布是否符合Hardy2Weinberg(H2W)平衡;各组等位基因频率!基因型频率分布差异比较应用SPSSforWindow进行计算,相对危险度(RR)应用woolf方法计算"

结果

11优化拟合检验:对患者组和对照组进行优化拟合检验的V2=1199,V2=2185,P均>0105,表明观察值与期望值之间的差异无显著性,患者组和对照组基因型分布符合H2W平衡定律"

21CCK2A受体等位基因及基因型的比较:患者组等位基因A1为42个!A2为126个,对照组A1为

31个!A2为109个;患者组基因型A1/1为39例!A2/2为45例,对照组A1/1为30例!A2/2为40例,两组差异均无显著性(P均>0105)"

31有无幻觉妄想综合征患者的CCK2A多态性等位基因频数比较:有幻觉妄想综合征的27例患者中A1为19个!A2为35个,无幻觉妄想综合征的57例患者中A1为23个,A2为91个,经V2检验,差异有显著性(V2=4140,T=1,P<0105),RR=2115,可归因子为0119"

41有无幻觉妄想综合征患者的CCK2A多态性基因型比较:有幻觉妄想综合征患者A1/2及A1/1为18例,A2/2为9例,无幻觉妄想综合征患者A1/2及A1/1为21例,A2/2为36例"经V2检验,差异有显著性(V2=6155,T=2,P<0105),RR=3144,可归因子为01477"

51有无一!二级家族遗传史患者的CCK2A基因型比较:在78例(有6例未能收集到资料)中,有家族遗传史患者A1/2及A1/1为11例,A2/2为6例,无家族遗传史患者A1/2及A1/1为22例,A2/2为39例"经V2检验,差异有显著性(V2=4147,T=1,P<0105),RR=3125,可归因子为0145"

61有无幻觉妄想综合征患者两组的CCK2A受体等位基因!基因型与对照组比较:无幻觉妄想综合征亚组与对照组之间CCK2A受体等位基因!基因型的差异无显著性(P均>0105);而有幻觉妄想综合征亚组CCK2A受体多态性等位基因频率与对照组比较差异存在显著性(V2=4106,P<0105),RR=2127,可归因子为0133"

讨论

已有研究发现,CCK2A受体主要分布在胃肠道系统,也选择性地分布在中枢神经系统[8]"在中枢神经系统,伏状核处的CCK2A受体调节DA释放增加,这可能与一些与DA功能异常有关的神经!精神疾病,如精神分裂症有关[9]"幻觉妄想综合征是精神分裂症典型的阳性症状"一般认为,阳性症状可能与DA能功能亢进有关"本研究发现,CCK2A受体基因的PstI多态性与精神分裂症幻觉妄想综合征相关,提示CCK2A受体基因可能在精神分裂症的幻觉妄想综合征发展过程中起作用"我们在参考GenBank数据库提供的CCK2A受体基因序列时发现,PstI多态性位点处在内含子1与外显子2的交接处,此处基因的变异,可能对CCK2A受体基因转录mRNA过程中的切割内含子步骤产生影响,进而使受体结合配体!或其他生物学功能发生障碍"当然,目前尚不能排除这种可能性:一个致病基因或与发病相关的基因与CCK2A受体基因紧密连锁"我们准备对基因测序!蛋白表达等以进一步探讨"